Worm ähnelt einem seed Schal … | Pinteres…

Accedi Campi nascosti Brevetti dostthaler.de dostthaler.de? The invention relates to novel insecticidal toxins derived from insecticidal crystal proteins from Bacillus worm ähnelt einem seed, nucleic acid sequences whose expression results in the toxins, worm ähnelt einem seed methods of making and methods of using the toxins and corresponding nucleic acid sequences to control insects. Insect pests are a major cause of crop loss. Allein in den USA gehen jedes Jahr Milliarden von Dollar aufgrund von Befall durch verschiedene Insektengattungen verloren.

In the US alone go every year billions of dollars lost due to infestation by various genera of insects. Zusätzlich zu den Verlusten an Feldanbauten sind Insektenschädlinge ebenfalls eine Belastung für Obst- und Gemüseproduzenten, worm ähnelt einem seed Erzeuger von Zierblumen und sind eine Last für Gärtner und Eigenheimbesitzer.

In addition to the loss of field crops insect pests are also a burden for fruit and vegetable producers, for producers of ornamental flowers and are a burden for gardeners and homeowners. Insect pests are mainly controlled by intensive spreading operations of chemical insecticides that are effective by inhibiting insect growth, prevention of insect diet or stress propagation or the death of the insect. Eine gute Insektenbekämpfung kann dadurch erreicht werden, aber diese Chemikalien können manchmal auch andere, worm ähnelt einem seed Insekten beeinträchtigen.

Good insect control can thus be reached, but these chemicals can sometimes also affect other, beneficial insects. Ein weiteres Problem, das aus der weiten Verwendung von chemischen Pestiziden resultiert, ist das Auftreten resistenter Insektensorten.

Another problem resulting from the wide use of chemical pesticides is the appearance of resistant insect varieties. Dies wurde teilweise durch verschiedene Resistenzbehandlungsstrategien abgemildert, aber es gibt einen zunehmenden Bedarf an alternativen Schädlingsbekämpfungsmitteln. This was partially mitigated by various resistance management strategies, but there is an increasing need for alternative pesticides.

Biological insect control agents such as Bacillus thuringiensis strains expressing insecticidal toxins have also been used with satisfactory results and thus offer an alternative or supplement to chemical insecticides. Bacillus thuringiensis belongs to the large group of gram-positive, aerobic, endosporenbildenden bacteria. Anders als andere, sehr eng verwandte Arten von Bacillus, wie zB B.

Unlike other very closely related species of Bacillus such as B. Diese Proteinkristalle sind verantwortlich für die Toxizität von Bacillus thuringiensis gegenüber Insekten.

These protein crystals are responsible for the toxicity ob es Würmer im Gehirn insects of Bacillus thuringiensis.

In den meisten Fällen wird die tatsächliche toxische Komponente aus dem Proxin als Ergebnis einer proteolytischen Spaltung freigesetzt, die durch die Wirkung von Proteasen aus dem Verdauungstrakt der Insekten verursacht wird.

In most cases the actual toxic component is released from the Proxin as a result of proteolytic cleavage worm ähnelt einem seed by the action of proteases from the digestive tract of the insects. On the basis of sequence homology and insecticidal specificity of Bacillus thuringiensis crystal proteins were categorized into different classes. To some extent the mode of action of crystal proteins has been elucidated.

Nach der oralen Aufnahme. This eventually leads to the rupture of the cells and death of the larvae. The spectrum of activity of a specific crystal protein is determined to a worm ähnelt einem seed extent by the presence of receptors on the epithelial cells of worm ähnelt einem seed midgut susceptible insects.

Das Spektrum wird zusätzlich bestimmt durch die Effizienz der Solubilisierung des Kristallproteins und seine Präventivmedizin für Würmer beim Menschen Aktivierung in vivo. Worm ähnelt einem seed spectrum is also determined by the efficiency of solubilization of the crystal protein and Ausschlag auf der Haut Würmer proteolytic activation in vivo.

Die Bedeutung der Bindung des Kristallproteins an epitheliale Rezeptoren im Mitteldarm wird weiter gezeigt, wenn Insekten worm ähnelt einem seed Resistenz gegen eines der Kristallproteine entwickelt haben, indem die Bindung von Kristallproteinen an Epithelzellen im Mitteldarm in resistenten Insekten signifikant reduziert ist. The importance of the binding of the crystal protein to midgut epithelial worm ähnelt einem seed is further demonstrated where insects have developed resistance to one of the crystal proteins in that the binding of crystal proteins to midgut epithelial cells in worm ähnelt einem seed insects is significantly reduced in.

In recent years, the genes have been isolated which code for some of these crystal proteins, and it was shown that their expression in heterologous hosts provide another tool for the control of economically important insect pests. Insbesondere hat die Expression von insektiziden Toxinen in transgenen Pflanzen, wie zB Bacillus thuringiensis-Kristallproteinen, einen wirksamen Schutz gegen ausgewählte Insektenschädlinge bereitgestellt, und transgene Pflanzen, die worm ähnelt einem seed Toxine exprimieren, wurden kommerzialisiert, worm ähnelt einem seed es Landwirten erlaubt, die Ausbringungen chemischer Insektenbekämpfungsmittel zu reduzieren.

In particular, the expression of insecticidal toxins in transgenic plants, such as Bacillus thuringiensis crystal proteins, provided worm ähnelt einem seed protection against selected insect pests, and transgenic plants expressing such toxins have been commercialized, allowing farmers to reduce the spreading operations of chemical insect worm ähnelt einem seed agents.

Moreover, it is also possible to express recombinant toxins that have a chosen combination of functions worm ähnelt einem seed to enhance the degree of insecticidal activity against a particular insect or a particular insect class, or to expand the spectrum of insects against the said toxin protein is active. It is believed that toxic worm ähnelt einem seed of crystal proteins are composed of three distinct structural domains.

Von den meisten Forschern wird angenommen, dass die Domäne II mit Rezeptoren wechselwirkt und dadurch die Toxinspezifität bestimmt. By worm ähnelt einem seed investigators is assumed that the domain II interacts with receptors and thereby determines the toxin specificity.

Tatsächlich gibt es viele Hinweise, die Reste der Domäne II mit der spezifischen Toxizität und einer hochaffinen Bindung in Verbindung bringen. In fact, there are many indications, the remains of domain II with the specific toxicity and a high-affinity binding into communication. Eine Vertauschung der Domäne III zwischen Toxinen, wie zB durch Rekombination in vivo zwischen den codierenden Regionen, kann zu Veränderungen der spezifischen Aktivität führen.

A permutation of the domain III between toxins, such as by in vivo recombination between the coding regions may lead to changes in specific activity. Binding experiments using such hybrids have shown that domain III is involved in binding worm ähnelt einem seed putative receptors of target insects, suggesting that domain III may exercise their role in specificity by a role in receptor recognition.

Siehe Nakamura et al. See, Nakamura et al. Ge et al, J. Solche hybriden Worm ähnelt einem seed besitzen eine veränderte insektizide Spezifität. Such hybrid insecticidal crystal proteins have an altered specificity. Also in De Maagd et al. Siehe ebenfalls Bosch et al. De Maagd worm ähnelt einem seed al. Despite the earlier successes that have been achieved by inserting insect-resistant genes through breeding programs and genetic manipulation, a long-lasting, but unfulfilled need for finding new and effective worm ähnelt einem seed remains.

Insbesondere benötigt werden Bekämpfungsmittel, die auf wirtschaftlich bedeutende Insektenschädlinge gerichtet sind, wie zB den Maiszünsler und den Asiatischen Baumwollwurm Fall Army Wormund die wirksam Insektenarten bekämpfen, die resistent gegen bestehende Insektenbekämpfungsmittel sind.

In particular, requires control agents, which are directed to worm ähnelt einem seed important insect pests such as the European corn borer and Asian cotton worm Fall Army Wormand the effective combat insect species, which are resistant to existing insect control worm ähnelt einem seed. Means are also desirable for their application minimizes environmental impact.

The present invention is directed to the aforementioned needs by new gene sequences are provided that encode hybrid Bacillus thuringiensis toxins, including synthetic nucleotide sequences optimized for expression in plants.

Die hybriden Bacillus thuringiensis-Toxine, die durch die neuen Gensequenzen codiert werden, sind hochwirksam gegen wirtschaftlich bedeutende Insektenschädlinge, wie den Asiatischen Baumwollwurm, den Roten Baumwollkapselwurm, den Tabakknospenwurm, den Maiszünsler und die Kohlmotte. The hybrid Bacillus thuringiensis toxins encoded by the novel gene sequences, are highly effective against economically important insect pests such as the Asian cotton worm, the pink bollworm, worm ähnelt einem seed budworm, the European corn borer, and diamondback moth.

Die hybriden Bacillus thuringiensis-Toxine können in multiplen Insektenbekämpfungsstrategien verwendet werden, was zu maximaler Effizienz bei minimalem Einfluss auf die Umwelt führt. The hybrid Bacillus thuringiensis toxins can be used in multiple insect control strategies, resulting in maximal efficiency with minimal impact on the environment.

The invention is further directed to the hybrid insecticidal toxins resulting from the expression of the nucleotide sequences of the invention, and to grow to compositions and formulations containing the hybrid insecticidal toxins, the ability of insect pests to survive, or to multiply, may restrict or inhibit insect-related damage or loss of crops.

Die Worm ähnelt einem seed ist ferner auf ein Verfahren zur Herstellung der Hybridtoxine und auf Verfahren der Verwendung der Nukleotidsequenzen, zB in transgenen Pflanzen, um Insektenresistenz zu verleihen, und auf Verfahren der Verwendung der Toxine und Zusammensetzungen und Formulierungen, die die Toxine umfassen, gerichtet, zB Ausbringen der Toxine, Zusammensetzung oder Worm ähnelt einem seed auf mit Insekten befallene Flächen, oder zur prophylaktischen Behandlung von für Insekten anfälligen Flächen oder Pflanzen, um Schutz oder Resistenz gegen schädliche Insekten zu verleihen.

The invention is further directed to a process for the preparation of the hybrid toxins and to methods of using the nucleotide sequences, for example Würmer bei Hunden nach der Impfung transgenic plants to confer insect resistance, and to methods of using the toxins, and compositions and formulations comprising the toxins, directed, for example, discharging of the toxins, composition, or formulation to insect infested areas, or to prophylactically treat insect-susceptible areas or plants to confer protection or resistance against harmful insects.

Die Hybridtoxine können in multiplen Insektenbekämpfungsstrategien verwendet werden, was zu maximaler Effizienz bei minimalem Einfluss auf die Umwelt führt. The hybrid toxins can be used in multiple insect control strategies, resulting in maximal efficiency with minimal impact on the environment. Die C-terminale Schwanzregion kann voller Länge sein oder kann trunkiert sein, wie zB auf eine Länge von ca. The C-terminal tail region worm ähnelt einem seed be full length or may be truncated, eg.

In a preferred embodiment of the above-described method of the invention, the transfer of an effective amount of the hybrid Bacillus thuringiensis toxin to the insect comprises feeding or contacting contacting the insect with transgenic plant tissue transformed with recombinant DNA which comprises a nucleotide sequence that encodes Schafe von Würmern hybrid Bacillus thuringiensis toxin, wherein expression of the hybrid Bacillus thuringiensis toxin confers resistance to the insect in transgenic plant tissue.

According to yet another aspect, the present invention provides a method worm ähnelt einem seed protecting a plant against insects, comprising expressing a hybrid Bacillus thuringiensis toxin in a plant transformed with a chimeric gene comprising: a a nucleic acid promoter sequence, the transcription of an associated coding sequence promotes in a plant at elevated levels, and b an inventive nucleic acid molecule which is operably linked to the promoter sequence, wherein expression of worm ähnelt einem seed hybrid Bacillus thuringiensis toxin in said plant protects said plant against insects.

According to a still other aspect, the present invention provides a method for producing a resistant plant against insects, comprising introducing a nucleic acid molecule of the invention into the plant, wherein the nucleic acid molecule in the plant in an effective amount for controlling insects is expressible. According to a further aspect, the present invention provides a composition comprising the hybrid Bacillus thuringiensis toxin of the invention in an effective amount to control insects.

Other aspects and worm ähnelt einem seed of the present invention are those skilled worm ähnelt einem seed a study of the following description of the worm ähnelt einem seed and non-limiting examples will be apparent. Wenn ein Toxin der Erfindung auf das Insekt übertragen wird, ist das Ergebnis typischerweise der Tod des Insekts, oder das Insekt frisst nicht an der Quelle, die das Toxin für das Insekt verfügbar macht. When a toxin of worm ähnelt einem seed invention is transferred to the insect, the result is typically death of the insect, or the insect does not eat at the source that makes the toxin available to the insect.

Zum Beispiel wird eine Promotor- oder regulatorische DNA-Sequenz als mit einer DNA-Sequenz "assoziiert" bezeichnet, die worm ähnelt einem seed eine RNA oder ein Protein codiert, falls die zwei Sequenzen funktionsfähig verbunden sind oder so angeordnet sind, dass die regulatorische DNA-Sequenz den Expressionsgrad der codierenden oder strukturellen DNA-Sequenz beeinflussen wird. For example, a promoter or regulatory DNA sequence is referred durch heraus die Würmer bei Katzen as "associated" with a DNA sequence coding for an RNA or a protein if the two sequences are operatively linked or are arranged such that the regulatory DNA sequence of the will affect the expression level of the coding or structural DNA sequence.

A "chimeric gene" is a recombinant nucleic acid sequence in which a promoter or regulatory nucleic acid sequence is operably linked to a nucleic acid sequence or associated therewith which encodes an mRNA or which is expressed as a protein, such that the regulatory nucleic acid sequence, the transcription or expression the associated nucleic acid sequence can regulate.

Die regulatorische Nukleinsäuresequenz des chimären Gens ist normalerweise nicht funktionsfähig mit der assoziierten Nukleinsäuresequenz verbunden, wie sie in der Natur gefunden wird.

The regulatory nucleic acid sequence of the chimeric gene is not normally associated functional with the associated nucleic acid sequence as found in nature. A "coding sequence" is a nucleic acid sequence which is transcribed into RNA such as mRNA, rRNA, tRNA, snRNA, sense RNA or antisense RNA. Bevorzugt wird die RNA dann in einem Organismus zur Erzeugung eines Proteins translatiert.

Preferably the RNA is then translated in an organism to produce a protein. Complementary: "complementary" denotes two nucleotide sequences which comprise antiparallel nucleotide sequences which can pair in worm ähnelt einem seed formation of hydrogen bonds between the complementary base residues in the antiparallel nucleotide sequences with each other.

Because of the degeneracy of the genetic code, encode a prazitel von Würmern für Katzen number of functionally identical nucleic acids encode any given polypeptide. Zum Beispiel codieren die Codonen CGT, CGC, CGA, CGG, AGA worm ähnelt einem seed AGG alle die Aminosäure Arginin. For example, the codons CGT, CGC, CGA, CGG, AGA and AGG all encode the amino acid arginine.

Somit kann das Codon an Würmer in einer Katze Nase Position, an der ein Arginin durch ein Codon spezifiziert wird, zu jedem der entsprechenden beschriebenen Codonen verändert werden, ohne das codierte Protein zu verändern. Thus, the codon at every position where an arginine is specified by a codon can be altered to any of the corresponding codons described without altering the encoded protein. Solche Nukleinsäurevariationen sind "stumme Variationen", die eine Art von "konservativ modifizierten Variationen" sind.

Such nucleic acid variations are "silent variations," which are one species of "conservatively modified variations". Jede hier beschriebene Nukleinsäuresequenz, die ein Protein codiert, beschreibt ebenfalls jede mögliche stumme Variation, ausgenommen wenn anders angegeben. Every nucleic acid sequence described herein which encodes a protein also describes every possible silent variation, except where otherwise indicated.

Ein Fachmann wird worm ähnelt einem seed, dass jedes Codon in einer Nukleinsäure ausgenommen ATG, das gewöhnlich das einzige Codon für Methionin ist durch Standardtechniken modifiziert werden kann, um ein funktionell identisches Molekül zu liefern. One of skill will recognize that each codon in a worm ähnelt einem seed acid except ATG, which is ordinarily the only codon for methionine can be worm ähnelt einem seed by standard techniques to yield a functionally identical molecule.

Entsprechend ist jede "stumme Variation" worm ähnelt einem seed Nukleinsäure, die ein Protein codiert, implizit in jeder beschriebenen Sequenz. Accordingly, each "silent variation" of a nucleic acid which encodes a protein is implicit in each described sequence. Konservative Substitutionstabellen, die funktionell ähnliche Aminosäuren bereitstellen, sind allgemein fachbekannt. Conservative substitution tables providing functionally similar amino acids are well known in the art.

Zusätzlich sind worm ähnelt einem seed individuelle Substitutionen, Deletionen oder Additionen, die eine einzelne Aminosäure oder einen kleinen Prozentanteil von Aminosäuren in einer codierten Sequenz verändern, addieren oder deletieren, "konservativ modifizierte Variationen".

In addition, individual substitutions, deletions or additions which alter a single amino acid or a small percentage of amino acids in an encoded sequence, add or delete, "conservatively modified variations". Insekten "zu bekämpfen" kann das Töten der Insekten bedeuten oder nicht, obwohl es bevorzugt das Töten der Insekten worm ähnelt einem seed. Das Toxin kann in vielen anerkannten Wegen übertragen werden, zB oral durch Nahrungsaufnahme durch das Insekt oder durch Kontakt mit dem Insekt durch transgene Pflanzenexpression, formulierte Proteinzusammensetzung ensprühfähige Proteinzusammensetzung worm ähnelt einem seedeine Lockmittelmatrix oder jedes andere fachlich anerkannte Toxinübertragungssystem.

The toxin can be transferred in many recognized ways, eg orally by ingestion by the insect or by contact with the insect by transgenic plant expression, formulated protein composition ssprayable protein composition sa bait matrix, or any other professional recognized toxin worm ähnelt einem seed system. An "expression cassette" as used herein means a nucleic acid sequence capable of directing expression of a particular nucleotide sequence in a suitable host cell comprising a promoter that is operably linked to the nucleotide sequence of interest which is operably linked to termination signals.

Sie umfasst typischerweise ebenfalls Sequenzen, die zur genauen Translation der Nukleotidsequenz erforderlich sind. Worm ähnelt einem seed also typically comprises sequences required for accurate translation of worm ähnelt einem seed nucleotide sequence. Die Expressionskassette, als Sie Darm-Würmer bei Kindern behandeln die Nukleotidsequenz von Interesse umfasst, kann chimär sein, was bedeutet, das wenigstens eine ihrer Komponenten heterolog in Bezug auf wenigstens eine ihrer anderen Komponenten ist.

The expression cassette comprising the nucleotide sequence of interest may be chimeric, meaning that at least one of its components is heterologous with respect to at least one of its other components. Die Expressionskassette kann auch eine solche sein, die natürlich auftritt, aber in einer rekombinanten Form erhalten wurde, die zur heterologen Expression nützlich ist. The expression cassette may also be one which occurs naturally, but was obtained in a recombinant form useful for heterologous expression.

Typischerweise ist die Expressionskassette jedoch heterolog in Bezug auf den Wirt, dh die besondere Nukleinsäuresequenz der Expressionskassette tritt nicht natürlich in der Wirtszelle auf und muss in die Wirtszelle oder einen Ahnen der Wirtszelle durch ein Transformationsereignis eingeführt worden sein. Typically, however, the expression cassette is heterologous to the host, ie the particular nucleic acid sequence of the worm ähnelt einem seed cassette does not occur naturally in the host cell and must have been introduced by a transformation event in the host cell or an ancestor of the host cell.

The expression of the nucleotide sequence in the expression cassette may be under the control of a constitutive promoter or of an inducible promoter are that initiates transcription only when the host cell is exposed to some particular external stimulus. Im Falle eines mehrzelligen Organismus, wie zB einer Pflanze, kann der Promotor auch spezifisch für ein besonderes Gewebe oder Organ oder Entwicklungsstadium sein.

In the case of a multicellular organism such as a plant, the promoter can also be specific to a particular tissue or organ or stage of development. Gene: The term "gene" is used broadly to refer to any segment of DNA associated with a biological function. Genes also include non-expressed DNA segments that, for example, form recognition sequences for other proteins.

The "gene of interest" may also be one that is transferred to plants for the production of commercially valuable enzymes or metabolites in the plant. Heterologous nucleic acid sequence: The term "heterologous nucleic acid [or DNA] sequence", "exogenous nucleic acid [or DNA] segment" or "heterologous gene", as used herein denote a sequence derived from a source is foreign to the particular host cell worm ähnelt einem seed, if from the same source is modified from its original form.

Thus, a heterologous gene in a host cell includes a gene that is endogenous to the particular host cell but has been modified for example by the use of codon optimization. The terms also include non-naturally occurring multiple copies of a naturally occurring sequence.

Somit bezeichnen die Begriffe ein Nukleinsäuresegment, das für die Zelle fremd oder heterolog ist oder für die Zelle homolog, aber in einer Worm ähnelt einem seed innerhalb der Nukleinsäure der Wirtszelle, in der das Element gewöhnlich nicht gefunden wird.

Thus, the terms refer to a nucleic acid segment that is foreign or heterologous to worm ähnelt einem seed cell or homologous to the cell but in a position within the host cell nucleic acid in which the element is ordinarily not found. Exogene Nukleinsäuresegmente werden exprimiert, um exogene Polypeptide zu liefern.

Exogenous nucleic acid segments are expressed to yield exogenous polypeptides. A "homologous" nucleic acid [or DNA] sequence is a course with a host cell into which it is introduced, associated nucleic acid [or DNA] sequence. Dies ist der normale Zustand in einer Pflanze, wenn die Plastide nicht transformiert, mutiert oder in anderer Weise genetisch verändert wurden.

This is the normal state in a plant worm ähnelt einem seed the plastids not transformed, mutated or genetically altered in another manner.

In unterschiedlichen Geweben oder Entwicklungsstadien können die Plastide unterschiedliche Formen annehmen, zB Chloroplasten, Proplastide, Etioplasten, Amyloplasten, Chromoplasten usw.

In different tissues or developmental stages of the plastids may take different forms, such as chloroplasts, Proplastide, etioplasts, amyloplasts, chromoplasts, etc. The terms "identical" or percent "identity" in the context of two or more nucleic acid or protein sequences, refer to two or more sequences or subsequences that are the same or have a specified percentage of amino acid residues or nucleotides that, when compared and alignment for maximum correspondence are equal, as measured using one of the sequence comparison algorithms described below or by visual inspection.

A nucleic acid sequence with a reference nucleic acid sequence "isocodierend" neutralwhen the nucleic acid sequence of a polypeptide having the same amino acid sequence as the polypeptide encoded worm ähnelt einem seed the reference nucleic acid sequence. Worm ähnelt einem seed "isolated" nucleic acid molecule or an isolated enzyme worm ähnelt einem seed a nucleic acid molecule or enzyme that exists by human hands outside its native environment and is therefore not a product of nature.

Ein isoliertes Nukleinsäuremolekül oder Enzym kann in einer gereinigten Form existieren oder kann in einer nicht-nativen Umgebung existieren, wie zB in einer rekombinanten Wirtszelle.

An isolated nucleic acid worm ähnelt einem seed or enzyme may exist in a purified form or may exist in a non-native environment such as in a recombinant host cell. Aminosäuren zur Linken des Überkreuzungsorts sind aus einem parentalen Toxin, wohingegen Aminosäuren zur Rechten des Überkreuzungsorts aus dem anderen parentalen Worm ähnelt einem seed sind. Amino acids to the left of the crossover location are from a parental toxin, whereas amino acids to the right of the crossover location worm ähnelt einem seed the other parental toxin are.

Mature protein: A protein that is normally directed to a cellular organelle and from which the transit peptide has been removed. Minimal Promoter: promoter elements, particularly a TATA element, that are inactive or greatly reduced promoter activity in the absence of upstream activation possess.

In Gegenwart eines geeigneten Transkriptionsfaktors wirkt der Minimalpromotor, um eine Transkription zu erlauben. Nemozol Suspension mit Würmern bei Kindern the presence of a suitable transcription factor, the minimal promoter functions to permit transcription. Native: refers to a gene that is present in the genome of an untransformed cell.

Naturally occurring occurring : The term "naturally occurring" is used to describe an object used, which is found in nature, in contrast to the artificial production by humans. Nucleic acid: The term "nucleic acid" refers to deoxyribonucleotides or ribonucleotides and polymers thereof in either single-stranded or double-stranded form. Wenn nicht spezifisch beschränkt, umfasst der Begriff Nukleinsäuren, die bekannte Analoga von natürlichen Nukleotiden enthalten, die ähnliche Bindungseigenschaften wie die Referenz-Nukleinsäure besitzen und in einer ähnlichen Weise zu natürlich vorkommenden Nukleotiden metabolisiert werden.

Unless specifically limited, the worm ähnelt einem seed encompasses nucleic acids containing known analogues of natural nucleotides which have similar binding properties as the reference Anzeichen von Darm-Würmern bei Kindern 8 Jahre acid and are metabolized in a manner similar to naturally Die größten Würmer in der Welt nucleotides.

Wenn nicht anders angegeben, umfasst eine besondere Nukleinsäuresequenz ebenfalls implizit konservativ modifizierte Varianten davon zB degenerierte Codonsubstitutionen und komplementäre Sequenzen sowie die explizit angegebene Sequenz. Unless otherwise stated, also eg degenerate codon substitutions includes a specific nucleic acid sequence implicitly conservatively modified variants thereof and complementary sequences as well as the sequence explicitly indicated.

Die Begriffe "Nukleinsäue" oder "Nukleinsäuresequenz" können ebenfalls austauschbar mit Gen, cDNA und durch ein Gen codierte mRNA verwendet werden. The terms "Nukleinsäue" or "nucleic acid sequence" may also be used interchangeably with gene, cDNA and mRNA encoded by a gene. A "plant" is any plant at any stage of development, worm ähnelt einem seed a seed plant. A "plant cell" is a structural and physiological unit of a plant, comprising a protoplast and a cell wall.

Die Pflanzenzelle kann in Form einer isolierten einzelnen Worm ähnelt einem seed oder einer kultivierten Zelle oder als Teil einer höheren organisierten Einheit sein, wie zB Pflanzengewebe, ein Pflanzenorgan oder eine ganze Pflanze.

The plant cell may be in form of an isolated single cell or a cultured cell, or as part of a higher organized unit such as, for worm ähnelt einem seed, plant tissue, a plant organ or a whole plant.

A "plant organ" is a distinct and visibly structured and differentiated part of a plant, such as root, stem, worm ähnelt einem seed, flower bud, or embryo. Jedes Gewebe einer Pflanze in planta oder in Kultur ist eingeschlossen. Each tissue of a plant in planta or in culture is included. Die Verwendung dieses Begriffs in Verbindung mit oder Abwesenheit von jedem spezifischen Typ von Pflanzengewebe, wie oben aufgeführt oder ansonsten von dieser Definition umfasst, soll worm ähnelt einem seed als exklusiv für jeden anderen Typ von Pflanzengewebe gedacht sein.

The use of this term in conjunction with, or the absence of any specific type of plant tissue as listed above or otherwise included in this definition shall not be construed as exclusive to any other type of plant tissue. A "promoter" is an untranslated DNA sequence upstream of the coding region that contains the binding site for RNA polymerase II and initiates transcription of the DNA. The promoter region may also include other elements that act as regulators worm ähnelt einem seed gene expression.

A "protoplast" is an isolated plant cell worm ähnelt einem seed a cell wall or with only parts of the cell wall. Reinheit und Homogenität werden typischerweise unter Verwendung von Techniken der analytischen Chemie bestimmt, wie zB Polyacrylamid-Gelelektrophorese oder Hochleistungsflüssigchromatographie.

Purity and homogeneity are typically determined using analytical chemistry techniques such as polyacrylamide gel electrophoresis or high performance liquid chromatography. Ein Protein, das die vorherrschende Art ist, die in einer Zubereitung vorhanden ist, ist im wesentlich gereinigt.

A protein that is the predominant species which is present in a preparation is substantially purified. Der Begriff "gereinigt" bezeichnet, dass eine Nukleinsäure oder ein Protein im wesentlichen zu einer Bande in einem elektrophoretischen Gel führt. The term "purified" denotes that a nucleic acid or a protein substantially results in a band in an electrophoretic gel. Insbesondere bedeutet es, dass die Nukleinsäure oder das Protein zu wenigstens ca. Two nucleic acids are "recombined" when sequences worm ähnelt einem seed each of the two nucleic acids are combined in Worm ähnelt einem seed. Zwei Sequenzen sind "direkt" rekombiniert, wenn beide Nukleinsäuren Substrate zur Rekombination sind.

Two sequences are "directly" recombined when both nucleic acids are substrates worm ähnelt einem seed recombination. Zwei Sequenzen sind "indirekt rekombiniert", wenn die Sequenzen unter Verwendung einer Zwischenstufe rekombiniert sind, wie zB mit einem Überkeuzungsoligonukleotid.

Two sequences are "indirectly recombined" when the sequences are recombined using an intermediate such as eg. With a Überkeuzungsoligonukleotid Zur indirekten Rekombination ist nicht mehr als worm ähnelt einem seed der Sequenzen ein tatsächliches Substrat zur Rekombination, und in manchen Worm ähnelt einem seed ist keine Sequenz ein Substrat zur Rekombination. For indirect recombination, no more than one of the sequences an actual substrate for recombination, and in some cases no sequence is a substrate for recombination.

Regulatorische Elemente umfassen einen Promotor, der funktionsfähig mit der interessierenden Nukleotidsequenz verbunden ist, und Terminationssignale. Regulatory elements comprise a promoter which is operably linked to the nucleotide sequence of interest and termination signals. Sie umfassen auch typischerweise Sequenzen, die zur genauen Translation der Nukleotidsequenz erforderlich sind. They also typically include sequences that are required for the accurate translation of the nucleotide sequence.

Bevorzugt besteht die substantielle Identität über eine Region der Sequenzen, die wenigstens ca. Worm ähnelt einem seed einer am meisten bevorzugten Ausführungsform sind die Sequenzen substantiell identisch über die gesamte Länge der codierenden Regionen. In a most preferred worm ähnelt einem seed, the sequences are substantially identical over the entire length of the coding regions. In addition, substantially identical nucleic acid or protein sequences perform substantially the same function.

For sequence comparison, typically one sequence acts as a reference sequence, to which test sequences worm ähnelt einem seed compared. Bei Verwendung eines Sequenzvergleichsalgorithmus werden Test- und Referenzsequenzen in einen Computer eingegeben, Untersequenzkoordinaten werden nach Bedarf festgelegt, und Parameter des Sequenzalgorithmusprogramms werden festgelegt. When using a sequence comparison algorithm, test and reference sequences are entered into a computer, subsequence coordinates are specified as necessary, and sequence algorithm program parameters worm ähnelt einem seed set.

Der Sequenzvergleichsalgorithmus berechnet dann die prozentuale Sequenzidentität für die Testsequenz en relativ zur Referenzsequenz auf Basis der festgelegten Programmparameter. The sequence comparison algorithm then calculates the percent sequence identity for the test sequence s relative to the reference sequence, based on the set program parameters.

An example of an algorithm that is suitable for determining percent sequence identity and sequence similarity is the BLAST algorithm, which. In Altschul et al beschrieben wird, J. Software zur Durchführung von BLAST-Analysen ist öffentlich verfügbar durch das National Center for Biotechnology Information dostthaler.de. Software for performing BLAST analyzes is publicly available through the National Center for Biotechnology Information dostthaler.de.

Dieser Algorithmus beinhaltet zuerst die Identifizierung von hoch punktenden Sequenzpaaren worm ähnelt einem seed scoring sequence pairs", HSPs durch Identifizierung kurzer Worte der Länge W in der Abfragesequenz, die einer Grenzwertbewertung T mit positivem Wert entsprechen worm ähnelt einem seed genügen, wenn sie mit einem Wort der gleichen Länge in einer Datenbanksequenz angeglichen werden.

This algorithm involves first identifying high-scoring sequence pairs "high scoring sequence pairs", HSPs by identifying short words of length W in the query sequence or in accordance with a threshold Review T with a positive value when combined with a word of the same length be aligned in a database sequence.

T wird als Wortbewertungsgrenzwert der Nachbarschaft bezeichnet Altschul et al. T is referred to as the neighborhood word score threshold Altschul et al. Diese worm ähnelt einem seed Nachbarschaftsworttreffer fungieren als Ausgangspunkte für Anfangssuchen, um längere HSPs zu finden, die sie enthalten. These initial neighborhood word hits act as starting points worm ähnelt einem seed the top searches to find longer HSPs containing them.

Die Worttreffer werden dann in beide Richtungen entlang jeder Sequenz so weit ausgedehnt, wie die kumulative Angleichungsbewertung erhöht werden kann. The word hits are then extended so far in both directions along each worm ähnelt einem seed for as far as the cumulative alignment score can be increased.

Für Aminosäuresequenzen wird eine Bewertungsmatrix zur Berechnung der kumulativen Bewertung verwendet. The Extension of the word hits in each direction are halted when the cumulative alignment score by the size of X decreases from its maximum achieved value, the cumulative score goes worm ähnelt einem seed zero or below returns due to the accumulation of one or more negative-scoring residue alignments or it reaches the end of each sequence.

Die Parameter W, T und X des BLAST-Algorithmus bestimmen die Empfindlichkeit und Geschwindigkeit der Angleichung. The parameters W, T and X of the BLAST algorithm determine the sensitivity and speed of the alignment. One measure of similarity provided by the BLAST algorithm is the smallest sum probability P N that specifies an indication of the probability by which a match between two nucleotide or amino acid sequences would occur by chance.

Zum Beispiel wird eine Test-Nukleinsäuresequenz als mit einer Referenzsequenz ähnlich betrachtet, falls die Wahrscheinlichkeit der kleinsten Summe in einem Vergleich der Test-Nukleinsäuresequenz mit der Referenz-Nukleinsäuresequenz weniger als ca. Another indication that two nucleic acid sequences are substantially identical is that the two molecules hybridize to each other under stringent conditions.

Der Begriff "spezifisch mit. The term "specifically hybridizing with. Längere Sequenzen hybridisieren spezifisch bei höheren Temperaturen. Longer sequences hybridize specifically at higher temperatures. Allgemein werden hochstringente Hybridisierungs- und Waschbedingungen mit ca. Typischerweise wird eine Sonde unter "stringenten Bedingungen" mit ihrer Ziel-Untersequenz hybridisieren, aber nicht mit anderen Sequenzen.

Typically a probe to its target subsequence hybridize under "stringent conditions", but to no other sequences. Sehr stringente Bedingungen werden als gleich mit T m für eine besondere Sonde ausgewählt. Very stringent conditions are selected to be equal to T m for a particular probe. Häufig geht einer hochstringenten Waschung eine niedrigstringente Waschung voraus, um Hintergrund-Sondensignal zu Gynäkologen und Würmer. Often, a high stringency wash is preceded by a low stringency wash to remove background worm ähnelt einem seed signal.

Für kurze Sonden zB ca. Stringente Bedingungen können ebenfalls durch Zugabe von destabilisierenden Mitteln wie Formamid erreicht werden. Stringent conditions may also be achieved by the addition of destabilizing agents such as formamide. Nukleinsäuren, die nicht miteinander unter stringenten Bedingungen hybridisieren, sind noch substantiell identisch, falls die Proteine, die sie codieren, substantiell identisch sind.

Nucleic acids worm ähnelt einem seed do not hybridize to each other under stringent conditions are still substantially identical if the proteins that they encode are substantially identical. Dies tritt zB auf, wenn eine Kopie einer Nukleinsäure unter Verwendung der maximalen, vom worm ähnelt einem seed Code erlaubten Codonentartung geschaffen wird.

This occurs, for example, when a copy of a nucleic acid is created using the maximum extent permitted by the genetic code Codonentartung. Another indication that two nucleic acid sequences or proteins worm ähnelt einem seed substantially identical is the one that the protein encoded by the first nucleic acid protein immunologically cross-reactive with the protein or specifically binds thereto, which is encoded by the second nucleic acid.

Somit ist ein Protein typischerweise substantiell identisch mit einem zweiten Protein zB dann, wenn sich die zwei Proteine nur durch konservative Substitutionen unterscheiden. Thus, a protein is typically substantially identical to a second protein, for example, when the two proteins differ only by conservative substitutions. The term "binds worm ähnelt einem seed or selectively to an antibody" or "specifically or selectively immunoreactive with," when referring to a protein or peptide refers to worm ähnelt einem seed binding reaction which determinative of the presence of the protein in the presence of a heterogeneous population of proteins and other biological agents is.

Somit binden wie von Würmern Ferkel zu geben festgelegten Immuntestbedingungen die spezifizierten Antikörper an ein besonderes Protein und binden nicht in signifikanter Menge an andere, in der Probe vorhandene Proteine. Thus, under specified conditions immunoassay the specified antibodies bind to a worm ähnelt einem seed protein and do not bind in a significant amount to other proteins present in the sample.

Die spezifische Bindung an einen Antikörper unter solchen Bedingungen kann einen Antikörper erfordern, der wegen seiner Spezifität für ein besonderes Protein ausgewählt wird. Specific binding to an antibody under such conditions may require an antibody that is selected for its specificity for a particular protein. Zum Beispiel können Antikörper, die gegen das Protein mit der Aminosäuresequenz erzeugt wurden, die durch jede der Nukleinsäuresequenzen der Erfindung codiert worm ähnelt einem seed, ausgewählt werden, um Antikörper zu erthalten, die spezifisch immunreaktiv gegenüber diesem Protein und nicht worm ähnelt einem seed anderen Proteinen sind, ausgenommen polymorphe Varianten.

Worm ähnelt einem seed example, antibodies raised against the protein having the amino acid sequence encoded by worm ähnelt einem seed of the nucleic acid sequences of the invention are selected to erthalten antibodies which are worm ähnelt einem seed immunoreactive with that protein and not against other proteins, except for polymorphic variants.

Eine Vielzahl von Immuntestformaten nemozol wenn Würmer, wie wenn man verwendet werden, um Antikörper auszuwählen, die spezifisch immunreaktiv gegenüber einem besonderen Protein sind. A variety of immunoassay formats may be used to select antibodies specifically immunoreactive with a particular protein.

For example, solid-phase ELISA immunoassays, Western blots, or worm ähnelt einem seed are routinely used to select monoclonal antibodies specifically immunoreactive with a protein. Aminosäuren zB Protein umfasst. A "subsequence" refers to a sequence of nucleic acids or amino acids which are a part of a longer sequence of nucleic acids or amino acids eg protein comprises.

Insbesondere bedeutet "Transformation" die stabile Integration eines DNA-Moleküls in das Genom eines interessierenden Organismus. In particular, "transformation" means the stable integration of a DNA molecule into the genome of an organism of interest. Transformierte Zelle, Gewebe oder Insekten werden als solche verstanden, die nicht nur das Endprodukt eines Transformationsprozesses umfassen, sondern auch transgene Nachkommenschaft davon. Transformed cell, tissue or insects are understood as such, which include not only the end product of a transformation process, but also transgenic progeny thereof.

Das Nukleinsäuremolekül kann stabil in das Genom des Wirts integriert sein, oder das Nukleinsäuremolekül kann ebenfalls als ein extrachromosomales Molekül vorhanden sein. The nucleic acid molecule can be stably integrated into the genome of the host or the nucleic acid molecule can also be present as an extrachromosomal molecule. Ein solches extrachromosomales Molekül kann selbstvermehrend sein. Such an extrachromosomal molecule can be self-augmenting. Transformierte Zellen, Gewebe oder Pflanzen werden so verstanden, dass sie nicht nur das Endprodukt worm ähnelt einem seed Transformationsprozesses umfassen, sondern auch transgene Worm ähnelt einem seed davon.

Transformed cells, tissues, or plants are worm ähnelt einem seed to encompass not only the end product of a transformation process, but also transgenic progeny thereof. Ein "nicht-transformierter", "nicht-transgener" oder "nicht-rekombinanter" Wirt bezeichnet einen Organismus vom Wildtyp, zB ein Bakterium oder eine Pflanze, der nicht das heterologe Nukleinsäuremolekül enthält.

A "non-transformed", "non-transgenic", or "non-recombinant" host refers to a wild-type organism, eg, a bacterium or a plant that does not contain the heterologous nucleic acid molecule. Nucleotides are indicated by their bases by the following standard abbreviations: adenine Acytosine Cthymine T and guanine G. This invention relates to novel nucleic acid sequences whose expression results in new toxins, and the making and using of the toxins to control insect pests.

Die durch die neuen Gensequenzen codierten hybriden Bacillus thuringienses-Toxine sind hochwirksam gegen wirtschaftlich bedeutende Insektenschädlinge, wie den Asiatischen Baumwollwurm, den Roten Baumwollkapselwurm, den Tabakknospenwurm, den Maiszünsler und die Kohlmotte. The proteins encoded by the novel gene sequences hybrid Bacillus thuringienses toxins are highly effective against economically important insect pests such as the Asian cotton worm, the pink bollworm, tobacco budworm, the European corn borer, and diamondback moth.

The present invention comprises DNA molecules comprising the nucleotide sequences that encode the insecticidal toxins of the invention. Die vorliegende Erfindung umfasst ferner rekombinante Vektoren, die die Nukleinsäuresequenzen dieser Erfindung umfassen. The present invention also includes recombinant vectors worm ähnelt einem seed the nucleic acid sequences of this invention.

In solchen Vektoren sind die Nukleinsäuresequenzen bevorzugt in Expressionskassetten enthalten, die regulatorische Elemente zur Expression der Nukleotidsequenzen in einer Wirtszelle umfassen, die die Nukleotidsequenzen exprimieren kann. In such vectors, the nucleic acid sequences are preferably included in expression cassettes comprising regulatory elements for expression of the nucleotide sequences in a host cell capable of expressing the nucleotide sequences.

Solche regulatorischen Elemente umfassen gewöhnlich Promotor- und Terminationssignale und umfassen ebenfalls bevorzugt Elemente, die eine effiziente Translation der durch die Nukleinsäuresequenzen der vorliegenden Erfindung codierten Proteine erlauben.

Worm ähnelt einem seed regulatory elements usually comprise promoter and termination signals and preferably also comprise elements allowing efficient translation of proteins encoded by the nucleic acid sequences Wenn Zähne während des Schlafes Schleifen Würmer the present invention proteins.

Vektoren, die die Nukleinsäuresequenzen worm ähnelt einem seed, können sich gewöhnlich in besonderen Wirtszellen vervielfältigen, bevorzugt als extrachromosomale Moleküle, und werden deshalb verwendet, um die Nukleinsäuresequenzen dieser Erfindung in den Wirtszellen zu amplifizieren.

Vectors comprising the nucleic acid sequences may in particular host cells usually reproduce, preferably as extrachromosomal molecules, and are therefore used to amplify the nucleic acid sequences of this invention in the host cells. In einer Ausführungsform sind Wirtszellen für solche Vektoren Mikroorganismen, wie Bakterien, insbesondere Bacillus thuringiensis oder E.

In one embodiment, host cells are microorganisms, such as bacteria, in worm ähnelt einem seed Bacillus thuringiensis or E. In einer anderen Ausführungsform sind Wirtszellen für solche rekombinanten Vektoren Endophyten oder Epiphyten.

In another embodiment, host cells for such recombinant vectors endophytes or epiphytes. Eine bevorzugte Wirtszelle für solche Vektoren ist eine eukaryontische Zelle, wie zB eine Pflanzenzelle. A preferred host cell for such vectors is a eukaryotic cell such worm ähnelt einem seed a plant cell.

Pflanzenzellen, wie zB Maiszellen, sind die am meisten bevorzugten Wirtszellen. Plant cells such as maize cells are most preferred host cells. In a worm ähnelt einem seed preferred embodiment, an insecticidal toxin of the invention is expressed in a plant. In diesem Fall schützen sich transgene Pflanzen, die wirksame Mengen der Toxine worm ähnelt einem seed, selbst vor Insektenschädlingen. In this case, to protect transgenic plants expressing effective amounts of the toxins themselves from insect pests.

Wenn die Insekten an einer solchen worm ähnelt einem seed Pflanze zu fressen beginnen, nehmen sie ebenfalls die exprimierten Toxine auf.

If the insects begin to feed on such a transgenic plant, they also take on the expressed toxins. This is the insect from further biting into the plant tissue deter or may even harm or kill the insect. The nucleic acid sequences described in this application may be introduced into plant cells using conventional recombinant Worm ähnelt einem seed technology.

Generally, this involves inserting a coding sequence of the invention into an wenn sie Welpen von Würmern gegeben system to which the coding sequence is heterologous ie, not normally present using standard cloning procedures known in the art may be used.

Der Vektor enthält die notwendigen Elemente zur Transkription und Translation der worm ähnelt einem seed Protein-codierenden Sequenzen.

The vector contains the necessary elements for transcription and translation of the inserted protein-coding sequences. A large number of vector systems known in the art can be used, such as plasmids, Bakteriophagenviren and other modified viruses. Transformierte Zellen können zu worm ähnelt einem seed Pflanzen regeneriert werden, so dass die Nukleotidsequenzen der Erfindung den transgenen Pflanzen Insektenresistenz verleihen.

Transformed cells can be regenerated into whole plants such that the nucleotide sequences of the invention confer insect resistance to the transgenic plants. According transformed plants may be monocots or dicots and include, but are not limited to: corn, wheat, barley, rye, sweet potato, bean, pea, chicory, lettuce, cabbage, cauliflower, broccoli, turnip, radish, spinach, worm ähnelt einem seed, onion, garlic, pepper, celery, squash, vegetables pumpkin, hemp, zucchini, apple, pear, quince, melon eg watermelonplum, cherry, peach, nectarine, apricot, strawberry, grape, raspberry, blackberry, pineapple, avocado, papaya, mango, banana, soybean, tomato, sorghum, sugarcane, sugar beet, sunflower, rapeseed, clover, tobacco, carrot, cotton, alfalfa, rice, potato, eggplant, cucumber, Arabidopsis, and woody plants such as conifers and deciduous trees.

Once a desired nucleotide Wie kommt man für 1 Tag in einem Erwachsenen zu Hause von den Würmern zu befreien has been transformed into a particular plant species, it may worm ähnelt einem seed propagated in the nature or transmitted in other varieties of the same species, particularly including commercial varieties, using conventional breeding techniques can be used.

For their expression in transgenic plants, the nucleotide sequences of the invention may require modification and worm ähnelt einem seed. Obwohl in vielen Von Würmern Welpen Yorker Gene aus mikrobiellen Organismen in Pflanzen in hohen Stärke ohne Modifikation exprimiert werden können, kann eine niedrige Expression in transgenen Pflanzen aus mikrobiellen Nukleotidsequenzen mit Codonen resultieren, die in Pflanzen nicht bevorzugt sind.

Although in many cases genes from microbial organisms can be expressed in plants at high strength without modification, low expression in transgenic plants may result from microbial nucleotide sequences having codons that are not preferred in plants. Es ist fachbekannt, dass alle Organismen spezifische Vorzüge für Würmer in der Vagina photo Codonverwendung besitzen, und die Codonen der in dieser Erfindung beschriebenen Nukleotidsequenzen können verändert werden, um den pflanzlichen Vorzügen zu entsprechen, während die dadurch codierten Aminosäuren beibehalten werden.

It is known in the art that all organisms have specific advantages for codon usage, and the codons of the nucleotide sequences described in this invention can be modified to suit the plant preferences, while the amino acids encoded thereby are maintained. Mikrobielle Nukleotidsequenzen, die geringe GC-Gehalte besitzen, mögen in Pflanzen aufgrund der Existenz von ATTTA-Motiven, die die Botschaften destabilisieren können, und aufgrund von AATAAA-Motiven, die eine unangemessene Polyadenylierung verursachen können, schlecht exprimieren.

Microbial nucleotide sequences that have low GC contents, like in plants due to the existence of ATTTA motifs that may destabilize the messages, and because of AATAAA motifs that may cause inappropriate polyadenylation, poorly worm ähnelt einem seed. Obwohl bevorzugte Gensequenzen angemessen in sowohl einkeimblättrigen als auch zweikeimblättrigen Pflanzenarten exprimiert werden können, können Sequenzen zur Berücksichtigung der worm ähnelt einem seed Codonvorzüge und CG-Gehaltsvorzüge von einkeimblättrigen oder zweikeimblättrigen Pflanzen modifiziert werden, da gezeigt worden ist, dass sich diese Vorzüge unterscheiden Murray et al.

Although preferred gene sequences may be adequately expressed in monocotyledonous as well as dicotyledonous plant species, sequences to take into account the specific Codonvorzüge and CG-content assets can be modified from monocotyledonous or dicotyledonous plants, since it has been shown that these advantages differ Murray et al.

In addition, the nucleotide sequences are screened for the existence of illegitimate splice sites that may cause a Botschafttrunkierung. For efficient initiation of translation, sequences adjacent to the initiating methionine, require modification. Zum Beispiel können sie durch den Einschluss von Sequenzen modifiziert werden, die als wirksam in Pflanzen bekannt Medikamente zur Behandlung von intestinalen Würmern in Menschen. For example, they can be modified by the inclusion of sequences known to be effective in plants.

Diese consensus-Sequenzen sind geeignet zur Verwendung mit den Nukleotidsequenzen dieser Erfindung. These consensus sequences are suitable for use with the nucleotide sequences of this invention. The expression of the nucleotide sequences in transgenic plants is driven by promoters Kätzchen von Würmern entfernt have been shown that they are functional in plants.

Die Wahl des Promotors wird abhängig von den zeitlichen und räumlichen Erfordernissen zur Expression und ebenfalls abhängig von der Zielart variieren. The choice of promoter will vary depending on the temporal and spatial worm ähnelt einem seed for expression, and also depending on the target species.

So ist die Expression der Nukleotidsequenzen dieser Erfindung in Blättern, in Ähren, in Blütenständen zB Ähren, Rispen, Kolben etc.

Thus, the expression of the nucleotide sequences of this invention in leaves, in ears, Tablets breite Wirkung von Würmern inflorescences eg spikes, racemes, pistons, etc. In vielen Fällen wird jedoch Schutz gegen mehr als einen Typ von Worm ähnelt einem seed gesucht, und daher ist die Expression in multiplen Geweben wünschenswert.

In many cases, however, protection is sought against more than one type of insect worm ähnelt einem seed, and thus expression in multiple tissues is desirable. Obwohl gezeigt worden ist, dass viele Promotoren aus zweikeimblättrigen Pflanzen funktionsfähig in einkeimblättrigen Pflanzen und umgekehrt sind, werden idealerweise zweikeimblättrige Promotoren zur Expression in zweikeimblättrigen Pflanzen ausgewählt und einkeimblättrige Promotoren zur Expression in einkeimblättrigen Pflanzen.

Although it has been shown that many promoters from dicotyledonous plants are operational in monocotyledons and vice versa, ideally dicotyledonous promoters are selected for expression in dicots and monocots promoters for expression in monocots. Die Nukleotidsequenzen dieser Erfindung können ebenfalls unter der Regulation von Promotoren exprimiert werden, die chemisch reguliert werden.

The nucleotide sequences of this invention may also be expressed under the regulation of promoters that are chemically regulated. Dies ermöglicht die Synthese der insektiziden Toxine allein dann, wenn die Nutzpflanzen mit den induzierenden Chemikalien behandelt werden.

This allows the synthesis of insecticidal toxins only when the crops are treated with the inducing chemicals.

A preferred category of promoters is that which is wound inducible. Zahlreiche Promotoren wurden beschrieben, die an Wundstellen und auch an den Stellen einer Phytopathogeninfektion exprimiert werden. Numerous promoters have been described which are expressed at wound sites and also at the points a Phytopathogeninfektion.

Idealerweise sollte ein solcher Promotor nur lokal aktiv an den Stellen der Infektion sein, und auf diese Weise reichern sich die insektiziden Toxine nur in den Zellen an, die die insektiziden Toxine synthetisieren müssen, um den eindringenden Insektenschädling zu töten. Ideally, there should only be active locally at the sites of infection, such a promoter, and in this way the insecticidal toxins accumulate only in the cells that need to synthesize the insecticidal toxins to kill the invading insect pest.

Preferred worm ähnelt einem seed of this kind include those described by Stanford et al. Preferred tissue-specific expression patterns include green tissue specific, worm ähnelt einem seed specific, stem specific, and flower-specific one. For expression in green tissue include many suitable promoters one that regulate genes involved in photosynthesis, and many of these have been cloned from both monocotyledons and dicotyledons.

A preferred stem worm ähnelt einem seed promoter is that described in U. Especially preferred embodiments of the invention are transgenic plants expressing at least one of the nucleotide sequences of the invention in a root-preferred or root-specific fashion.

Weitere bevorzugte Ausführungsformen sind transgene Pflanzen, die die Nukleotidsequenzen in einer wundinduzierbaren oder Pathogeninfektioninduzierbaren Weise exprimieren. Further preferred embodiments are transgenic plants expressing the nucleotide sequences in a wound-inducible or Pathogeninfektioninduzierbaren way.

In addition to the selection of a suitable promoter for expression of constructions require insecticidal toxin in plants, the binding of an appropriate transcription terminator downstream of the heterologous nucleotide sequence.

Jeder verfügbare Terminator, worm ähnelt einem seed als in Pflanzen funktionsfähig bekannt ist, kann im Zusammenhang mit der Erfindung verwendet werden. Any available terminator which is functional in plants known as may be used in connection with the invention.

Numerous other sequences can be incorporated into expression cassettes described in this invention. It may be preferred to align the expression of the nucleotide sequences of the present invention to different cellular locations in the plant.

In manchen Fällen kann die Lokalisierung im Cytosol wünschenswert sein, wohingegen in anderen Fällen eine Lokalisierung in einer gewissen subzellulären Organelle worm ähnelt einem seed die Sprache der Person bei Würmern kann, Eine subzelluläre Lokalisierung der durch das Transgen codierten Enzyme erfolgt unter Verwendung von allgemein fachbekannten Techniken.

In some cases, localization in the cytosol may be desirable, whereas a localization in a certain subcellular organelle may be preferred in other cases, a subcellular localization of the proteins encoded by the transgene enzymes is carried out using techniques well known in the art techniques.

Typischerweise wird die DNA, die das Zielpeptid aus einem bekannten, auf eine Organelle gerichteten Genprodukt codiert, manipuliert und stromaufwärts der Nukleotidsequenz fusioniert. Typically, the DNA encoding the target peptide from a known, directed to an organelle gene product is manipulated and fused upstream of the nucleotide sequence. Viele solche Zielsequenzen sind für den Chloroplasten bekannt, und ihre Funktion in heterologen Konstruktionen wurde gezeigt.

Many such target sequences are known for the chloroplast and their function in heterologous constructions has been shown. The expression of the nucleotide sequences according to the invention is also directed to the endoplasmic reticulum or to the vacuoles of the host cells.

Techniken, um dies zu erreichen, worm ähnelt einem seed allgemein fachbekannt. Techniques to achieve this are well known in the art. Suitable for Brühe mit Knoblauch von Würmern transformation vectors are described elsewhere in this specification. Für die Agrobacterium-vermittelte Transformation sind binäre Vektoren oder Vektoren, die wenigstens eine T-DNA-Randsequenz tragen, geeignet, wohingegen für den direkten Gentransfer jeder Vektor geeignet ist und eine lineare DNA, die nur die interessierende Konstruktion worm ähnelt einem seed, bevorzugt sein kann.

For Agrobacterium-mediated transformation are binary vectors or vectors worm ähnelt einem seed at least one T-DNA border sequence, suitable, whereas for direct gene transfer any vector is suitable and linear DNA containing only the construction of interest may be preferred.

Im Falle des direkten Gentransfers kann eine Transformation mit einer einzelnen DNA-Art oder eine Co-Transformation verwendet werden Schocher et al. In the case of direct gene transfer, transformation with a single DNA species or co-transformation can be used Schocher et al, Biotechnology. Für sowohl direkten Gentransfer als auch Agrobacterium-vermittelten Transfer erfolgt die Transformation gewöhnlich aber nicht notwendigerweise mit einem selektierbaren Marker, der Resistenz gegen ein Antibiotikum Kanamycin, Hygromycin oder Methotrexat oder ein Herbizid Basta worm ähnelt einem seed kann.

For both direct gene worm ähnelt einem seed and Agrobacterium-mediated transfer the transformation usually but not necessarily with a selectable marker, the resistance to an antibiotic kanamycin, hygromycin or methotrexate or a herbicide Basta are able to worm ähnelt einem seed. Die Wahl des selektierbaren oder durchmusterungsfähigen Markers zur Pflanzentransformation ist jedoch nicht kritisch für die Erfindung.

However, the choice of selectable or screenable marker for plant transformation is not critical to the invention. The above-described recombinant DNA can be introduced into the plant cell in a number of ways to professionally recognized. Die Fachleute werden einsehen, dass die Wahl des Verfahrens vom Typ der Pflanze abhängen könnte, auf den die Transformation ausgerichtet ist. The professionals will appreciate that the choice of procedure of the type of plant could depend on which the transformation is aligned.

Paszkowski et al, EMBO J. Siehe ebenfalls Weissinger et al. See also Weissinger et al. Ein besonders bevorzugter Satz von Ausführungsformen zur Einführung von rekombinanten DNA-Molekülen in Mais durch Mikroprojektilbombardierung kann gefunden werden in Koziel et al.

A particularly preferred set of embodiments for the introduction of recombinant DNA molecules into maize by microprojectile bombardment can be found in Koziel et al, Biotechnology. Worm ähnelt einem seed Transformation von Pflanzen kann mit einer einzelnen DNA-Art oder multiplen DNA-Arten dh Co-Transformation erfolgen, und diese beiden Techniken sind geeignet zur Verwendung mit einer codierenden Sequenz der Erfindung. The transformation of plants can be done with a single DNA species or multiple DNA species ie, co-transformation and both these techniques are suitable for use with a coding sequence of worm ähnelt einem seed invention.

In another preferred embodiment, a nucleotide sequence according to the invention is directly transformed into the plastid genome. Ein Hauptvorteil der Plastidtransformation besteht darin, dass Plastide allgemein bakterielle Gene ohne substantielle Modifikation exprimieren können, und Plastide können multiple offene Leseraster unter der Kontrolle eines einzelnen Promotors exprimieren.

A major advantage of plastid transformation is that plastids are capable of expressing bacterial genes without substantial modification in general, and plastids are worm ähnelt einem seed of expressing multiple open reading frames under control of a single promoter. Die Grundtechnik für die Chloroplastentransformation beinhaltet das Einführen von Regionen klonierter Plastid-DNA, die worm ähnelt einem seed selektierbaren Marker flankiert, zusammen mit dem interessierenden Gen in ein geeignetes Zielgewebe, zB unter Verwendung von biolistischen Verfahren oder Protoplastentransformation worm ähnelt einem seed Calciumchlorid- oder PEG-vermittelte Worm ähnelt einem seed. The basic technique for chloroplast transformation involves introducing worm ähnelt einem seed of cloned plastid DNA flanking a selectable worm ähnelt einem seed together with the gene of interest into a worm ähnelt einem seed target tissue, for example using the biolistic method or protoplast transformation for example, calcium chloride or PEG mediated transformation.

Hajdukiewicz and Maliga, Worm ähnelt einem seed. JM dust and Maliga, P. Die Gegenwart von Klonierungsorten zwischen diesen Markern erlaubte die Schaffung eines Plastid-Targeting-Vektors zur Einführung von Fremdgenen JM Staub und P. The presence of cloning sites between these markers allowed creation of a plastid targeting vector for introduction of foreign genes JM dust and Maliga, P.

Zuvor war dieser Marker erfolgreich zur Transformation des Plasidgenoms der Grünalge Chlamydomonas reinhardtii mit hoher Häufigkeit verwendet worden M. Previously, this marker had been used successfully for the transformation of Plasidgenoms of the green alga Chlamydomonas reinhardtii at a high frequency M.

Andere selektierbare Marker, die zur Plastidtransformation nützlich sind, sind fachbekannt und vom Erfindungsumfang umfasst. Other selectable markers useful for plastid transformation are known in the art and encompassed within the scope of the invention. In a preferred embodiment, a nucleotide sequence according to the invention is inserted into a plastid targeting vector and transformed into the plastid genome of a desired plant host.

Plants that are homoplastidisch for plastid genomes containing a nucleotide sequence according to the invention are obtained, and worm ähnelt einem seed preferably capable of high level expression of the nucleotide sequence. The invention is further described by reference to the following detailed examples.

Diese Beispiele werden allein für Veranschaulichkeitszwecke bereitgestellt und sind nicht zur Beschränkung gedacht, wenn nichts anderes angegeben ist. These examples are provided solely for Veranschaulichkeitszwecke and are not intended to be limiting unless otherwise specified.

Maniatis, EF Fritsch und J. Maniatis, EF Fritsch and J. Die vollständige Ultraschallbehandlung wird unter dem Mikroskop überprüft. The full sonication is checked under a microscope.

Eine Überlappung mit ca. Oligonukleotide können zB durch Genosys Biotechnologies Inc. Oligonucleotides for example, by Genosys Biotechnologies Inc. Jedes Paar von Oligomeren wird unter Verwendung des Enzyms Polynukleotidkinase von zB New England Biolabs, Inc. Each pair of oligomers is hybridized and phosphorylated using the enzyme polynucleotide kinase eg New England Biolabs, Inc.

Die Kolonien werden auf inserierte DNA worm ähnelt einem seed. Colonies are screened for inserted DNA. Die DNA wird sequenziert, und Klone, die die korrekte Sequenz enthalten, werden selektiert. The DNA is sequenced and clones containing the correct sequence are selected.

Die Fragmente werden dann durch Restriktionsverdau, Ligation und Transformation unter Verwendung besonderer Restriktionsorte zwischen den Fragmenten verbunden. The fragments are then joined by restriction worm ähnelt einem seed, ligation and transformation using specific restriction sites between worm ähnelt einem seed fragments. The nucleotide sequences described in this application can be modified for expression in transgenic plant hosts.

Eine Wirtspflanze, die die Nukleotidsequenzen exprimiert und die insektiziden Toxine in ihren Zellen erzeugt, besitzt eine gesteigerte Resistenz gegen Insektenangriffe und ist somit besser ausgerüstet, um Anbauverlusten zu widerstehen, die mit einem solchen Angriff verbunden sind. Kuh Würmer sie loswerden host plant expressing the nucleotide sequences and produces the insecticidal toxins in their cells, has an improved resistance worm ähnelt einem seed insect attack and is thus better Würmer in einem Kind 2 Jahren Drogen to withstand mounting losses associated with such an attack.

The transgenic expression in plants of genes derived from microbial sources may require the modification of those genes to achieve and optimize their expression in plants to. Insbesondere werden bakterielle ORFs, die separate Enzyme codieren, die aber durch das gleiche Transkript in der nativen Mikrobe codiert werden, am besten in Pflanzen auf Symptome in Gegenwart von Würmern in den Körper Transkripten exprimiert.

In particular, bacterial ORFs that encode separate enzymes but which are encoded by the same transcript in the native microbe, best expressed in plants on separate transcripts.

The isolated ORF sequence preferably includes the ATG start codon and the terminating STOP codon but may include additional sequence worm ähnelt einem seed the ATG start and stop codon addition. Mit "Pflanzenpromotor" und "Pflanzentranskriptionsterminator" sollen Promotoren und Transkriptionsterminatoren gemeint sein, die innerhalb von Pflanzenzellen arbeiten. By "plant promoter" and "plant transcriptional terminator" is intended to mean promoters and transcriptional terminators which operate within plant cells.

This includes promoters and transcription terminators derived from non-plant sources such as viruses an example is the cauliflower mosaic virus. In some cases, modification to the ORF coding sequences and adjacent sequences is not required. Es ist ausreichend, ein Fragment zu isolieren, das das interessierende ORF enthält, und es stromabwärts eines Pflanzenpromotors zu inserieren. It is sufficient to isolate a fragment containing the ORF of interest and to insert it downstream of a plant promoter.

Zum Beispiel haben Gaffney et al. For instance, Gaffney et al. Bevorzugt sollte so wenig benachbarte mikrobielle Sequenz stromaufwärts des ATG- und stromabwärts des STOP-Codons gebunden bleiben. Preference should be as little adjacent microbial sequence upstream of the ATG and downstream of the stop codon remain bound.

In der Praxis kann eine solche Konstruktion von der Verfügbarkeit von Restriktionsorten abhängen. In practice, such a construction on the availability of restriction sites depend. In other cases, the expression of genes derived from microbial sources, cause problems in expression. Diese Probleme wurden auf diesem Gebiet gut charakterisiert und sind besonders üblich bei Genen, die aus bestimmten Quellen wie Bacillus stammen. These problems have worm ähnelt einem seed well characterized in worm ähnelt einem seed art and are particularly common with genes derived from certain sources such as Bacillus.

Diese Probleme können auf die Nukleotidsequenz dieser Erfindung zutreffen, und die Modifikation dieser Gene kann worm ähnelt einem seed Verwendung von Techniken erfolgen, die jetzt allgemein fachbekannt sind. These problems may apply to the nucleotide sequence of this invention and the modification of these genes can be made using techniques which are now generally known in the art.

The preferred codon usage in plants differs from the preferred codon usage in certain microorganisms. Ein Vergleich der Verwendung von Codonen innerhalb eines klonierten mikrobiellen ORF mit der Verwendung in Pflanzengenen und insbesondere in Genen aus der Zielpflanze wird eine Identifizierung der Codonen innerhalb des ORF ermöglichen, das bevorzugt verändert werden sollte.

A comparison of the use of codons within a cloned microbial ORF with the use in plant genes and in particular genes from the target plant will enable identification of the codons within the ORF which should preferably be changed.

Typischerweise hat die Pflanzenevolution zu einer starken Präferenz für die Nukleotide C und G in der dritten Basenposition von einkeimblättrigen Pflanzen geneigt, wohingegen zweikeimblättrigen Pflanzen häufig die Nukleotide A oder T in dieser Position verwenden. Typically plant evolution has tended to be a strong preference worm ähnelt einem seed the nucleotides C and G in the third base position of monocotyledons, whereas dicotyledons often use the nucleotides A or T at this position.

ORF-Sequenzen, die reich an A- und T-Nukleotiden sind, können mehrere Probleme in Pflanzen verursachen. ORF sequences which are rich in A and T nucleotides can cause several problems in plants.

Zweitens wird angenommen, dass das Auftreten von Polyadenylierungssignalen, wie AATAAA, an ungeeigneten Positionen innerhalb der Botschaft eine voreilige Trunkierung der Transkription verursacht. Second, it is assumed that the occurrence of polyadenylation signals such as AATAAA at inappropriate positions within the message caused a premature truncation of transcription.

In addition monocots AT-rich sequences as splice sites recognize see below. Plants differ from microorganisms in that their messages do not have a defined ribosome binding site. Dennoch wird angenommen, dass es eine Bevorzugung für bestimmte Nukleotide gibt, Würmer Hühnerfleisch zum ATG benachbart sind, und dass eine Expression mikrobieller Gene durch den Einschluss eines eukaryontischen consensus-Translationsinitiators am ATG gesteigert werden worm ähnelt einem seed. Nevertheless, it is believed that there is a preference for certain nucleotides adjacent to the ATG and that expression of microbial genes by the inclusion of a eukaryotic consensus translation initiator at the ATG can be increased.

In Situationen, in den Schwierigkeiten bei der Expression von mikrobiellen ORFs in Pflanzen angetroffen werden, kann der Einschluss einer dieser Sequenzen am einleitenden ATG die Translation verbessern. In situations encountered in the difficulties in the expression of microbial ORFs in plants, inclusion of one of these sequences at the initiating ATG may improve translation.

In solchen Fällen mögen die letzten drei Nukleotide der consensus-Sequenz nicht angemessen zum Einschluss in der modifizieten Sequenz aufgrund ihrer Modifikation des zweiten AA-Restes sein.

In such cases the last three nucleotides of the consensus sequence may not be appropriate for inclusion in the modifizieten sequence due to their modification of the second AA residue. Bevorzugte Sequenzen, die zum einleitenden Methionin benachbart sind, können sich zwischen unterschiedlichen Pflanzenarten unterscheiden. Preferred sequences adjacent to the initiating methionine may differ between different worm ähnelt einem seed species.

This analysis worm ähnelt einem seed be done for the desired plant species into worm ähnelt einem seed the nucleotide sequence is to be introduced, and the sequence adjacent to the ATG modified to introduce the preferred nucleotide. Diese Worm ähnelt einem seed können unter Verwendung der allgemein fachbekannten Techniken entfernt werden.

These sites can be removed using the techniques generally known worm ähnelt einem seed the art. Techniques for modifying coding sequences and adjacent sequences are well known. In the cases where the initial expression of a microbial ORF is low and it is deemed appropriate to make alterations to the sequence carried out as described above, the construction of synthetic genes according to methods well known can be achieved. In den meisten Fällen ist es bevorzugt, die Expression von Genstruktionen unter Verwendung von transienten Assay-Protokollen die allgemein fachbekannt sind vor ihrer Übertragung auf transgene Pflanzen zu untersuchen.

In most cases it is preferred that expression of Genstruktionen using transient assay protocols which are well known in the art to be examined for transgenic plants before their transmission. Coding sequences intended for expression in transgenic plants are first assembled Wurm Haken expression cassettes behind a suitable promoter expressible in plants.

Die Expressionskassetten können auch beliebige weitere Sequenzen umfassen, die zur Expression des Transgens erforderlich sind oder ausgewählt werden. The expression cassettes may also comprise any further sequences required for expression of the transgene, or can Kinder von Würmern ab 1 Jahr selected. Such sequences include, but are not limited to, worm ähnelt einem seed terminators, extraneous sequences to enhance expression such as introns, vital sequences, and sequences intended to specific organelles and cell compartments to the orientation of the gene product.

Diese Worm ähnelt einem seed können dann leicht auf die nachfolgend beschriebenen Pflanzentransformationsvektoren übertragen werden. These expression cassettes can then be easily transferred to the plant transformation vectors described below.

The selection of the promoter used in expression cassettes will determine the spatial and temporal expression pattern worm ähnelt einem seed the transgene in the transgenic plant. Ausgewählte Promotoren werden Transgene in spezifischen Zelltypen wie Blatt-Epidermiszellen, Mesophyllzellen, Wurzelcortexzellen oder in spezifischen Geweben oder Organen zB Wurzeln, Blätter oder Blüten exprimieren, und die Selektion wird den gewünschten Ort der Anreicherung des Genprodukts widerspiegeln.

Selected promoters will transgenes in specific cell types such as leaf epidermal cells, mesophyll worm ähnelt einem seed, root cortex cells or in specific tissues or organs for example, roots, leaves or flowers expressing, and the selection will reflect the desired location of accumulation of the gene product.

Alternativ kann der ausgewählte Promotor die Expression des Gens unter verschiedenen induzierenden Worm ähnelt einem seed antreiben. Alternatively, the selected promoter may drive the expression of the gene under various inducing conditions.

Promotoren variieren in worm ähnelt einem seed Stärke, dh Fähigkeit zur Förderung der Transkription. Promoters vary in their strength, ie, ability to promote transcription. Depending upon the host cell system utilized, any of a number of suitable promoters can be used, including the native promoter of the gene. Nachfolgend sind nicht-beschränkende Beispiele für Promotoren, die in Expressionskassetten verwendet werden können.

The following are non-limiting examples of promoters that can be used in expression cassettes. Konstitutive Expression, der Ubiquitinpromotor: a. Ubiquitin is a gene product of which is known to accumulate in many cell types and its promoter was isolated from several species for use in transgenic plants cloned eg sunflower - Binet et al, Plant Science. The Arabidopsis ubiquitin promoter is ideal for use with the nucleotide sequences according to the invention.

Worm ähnelt einem seed Ubiquitinpromotor ist geeignet zur Genexpression in transgenen Pflanzen, sowohl einkeimblättrigen als auch zweikeimblättrigen. The ubiquitin promoter is suitable for gene expression in transgenic plants, monocotyledonous as well as dicotyledonous. Nach Wunsch können Modifikationen um die Klonierungsorte herum durch Einführung von Sequenzen vorgenommen werden, die die Translation steigern können.

If desired, modifications around the cloning sites around can be made by introducing sequences that may enhance translation. Dies ist besonders nützlich, wenn eine Überexpression gewünscht ist. This is particularly useful when overexpression is desired. It is known that several isoforms of actin are expressed in most cell types and consequently the actin promoter is a good choice for a constitutive promoter. Insbesondere wurde der Promotor aus dem ActI-Gen von Reis kloniert und charakterisiert McElroy et al.

In particular, the promoter was cloned from the ActI worm ähnelt einem seed from rice and characterized McElroy et al, Plant Cell. Ferner wurden zahlreiche Expressionsvektoren auf Basis des ActI-Promotors spezifisch zur Verwendung in worm ähnelt einem seed Pflanzen konstruiert McElroy et al.

Furthermore, numerous expression vectors based on the ActI promoter specifically for use in monocotyledons McElroy et al, Mol Gen. Die Optimierung von Worm ähnelt einem seed um das einleitende ATG des GUS-Reporter-Gens herum steigerten ebenfalls wie Sie wissen, wenn Sie eine Katze Würmer Expression.

The optimization of sequences around the initiating ATG of the GUS reporter gene also increased the worm ähnelt einem seed around. Die von McElroy et al. The McElroy et al. Die so konstruierten Fusionsgene können dann auf geeignete Transformationsvektoren übertragen werden. The fusion genes thus constructed can then be transferred to appropriate transformation vectors.

In einem getrennten Bericht wurde ebenfalls festgestellt, dass der ActI-Promotor von Reis mit seinem ersten Intron eine hohe Expression in worm ähnelt einem seed Gerstenzellen ausrichtet Chibbar et al. In a separate report was also found that the ActI promoter of rice aligns with its first intron high expression in cultured barley cells Chibbar et al, Plant Cell Rep.

By way of example, one worm ähnelt einem seed the chemically regulatable promoters described in U. Alternativ kann der in Lebel et al. Der Promotor der Wahl wird bevorzugt aus seiner Quelle durch Restriktionsenzyme ausgeschnitten, aber kann alternativ unter Verwendung von Primern PCR-amplifiziert werden, die geeignete terminale Restriktionsorte tragen.

The promoter of choice is preferably excised from its source by restriction enzymes, but can alternatively be PCR-amplified using primers that carry appropriate terminal restriction sites. Sollte eine PCR-Amplifikation vorgenommen werden, dann sollte der Promotor erneut sequenziert werden, worm ähnelt einem seed auf Amplifikationsfehler nach der Klonierung des amplifizierten Promotors im Zielvektor zu überprüfen.

Should PCR-amplification be undertaken, then the promoter should be resequenced to check for amplification errors after the cloning of the amplified promoter in the target vector. The selected coding sequence can be inserted into this worm ähnelt einem seed, and the fusion products ie promoter-gene-terminator can subsequently at each selected transformation vector, including those described below, are transmitted. Induzierbare Expression, ein Ethanol-induzierbarer Promotor: e.

An inducible by certain alcohols or ketones, such as ethanol promoter can also be used to confer inducible expression of a coding sequence of the present invention.

Ein solcher Promotor ist zB der alcA-Genpromotor aus Aspergillus nidulans Caddick et al. Dies wird unter Verwendung von allgemein fachbekannten Verfahren durchgeführt. This is done using methods well known. Induzierbare Expression, ein Glukokortikoid-induzierbarer Promotor F. The induction of expression of a nucleic acid sequence according to the invention using systems based on steroid hormones is also contemplated. Die Expression des Fusionsproteins wird durch jeden Promotor gesteuert, der zur Expression in Pflanzen geeignet ist, fachbekannt oder hier beschrieben.

The expression of the fusion protein is controlled by any promoter suitable for expression in plants known in the art or described herein. Somit wird eine Gewebe- oder Organspezifität des Fusionsproteins erreicht, was zu induzierbarer Gewebe- oder Organspezifität des insektiziden Toxins führt. Thus, a tissue- or organ-specificity of the fusion protein is achieved leading to inducible tissue- or organ-specificity of the insecticidal toxin.

Another pattern of gene expression is root expression. Wundinduzierbare Promotoren: h Wound promoters. Wound promoters may also be suitable for gene expression.

Zahlreiche solche Promotoren wurden beschrieben zB Xu et al. In ähnlicher Weise haben Firek et al. Similarly, have Firek et al. Unter Verwendung von allgemein fachbekannten Klonierungstechniken können diese Promotoren auf geeignete Vektoren übertragen, an die Gene fusioniert werden, die diese Erfindung betrifft, und zur Expression dieser Gene an den Orten der pflanzlichen Verwundung verwendet werden.

Using cloning techniques generally known in the art, these promoters can be transferred to suitable vectors, fused to the genes which this invention pertains, and are used for expression of these genes at the sites of plant wounding.

Tatsächlich können Fragmente, die den markbevorzugten Promotor oder Teile davon enthalten, auf jeden Vektor übertragen und worm ähnelt einem seed Benutzen in transgenen Pflanzen modifiziert werden. In fact, fragments containing the mark preferred promoter or parts thereof are transferred to any vector and modified for use worm ähnelt einem seed transgenic plants. Unter Verwendung von molekularbiologischen Standardtechniken kann der Promotor für dieses Gen zum Antreiben der Expression jedes Gens in einer blattspezifischen Weise in transgenen Pflanzen verwendet werden.

Using standard molecular biological techniques the promoter for this gene can be used each gene in a leaf-specific manner in transgenic plants worm ähnelt einem seed driving expression. A variety of transcriptional terminators are available for use in expression cassettes. Diese sind verantwortlich zur Termination der Transkription über das Transgen hinaus und seine korrekte Polyadenylierung.

These are responsible for the termination of transcription beyond the transgene and its correct polyadenylation addition. Diese können sowohl in einkeimblättrigen als auch worm ähnelt einem seed Pflanzen verwendet werden. These can be used in both monocotyledons and dicotyledons. Zusätzlich kann ein nativer Transkriptionsterminators des Gens verwendet werden. In addition, a native transcription terminator of the gene can be used.

Würmer als zurückzutreten has been found that various sequences to enhance gene expression from within the transcriptional unit and these sequences can be used in conjunction with the genes of this invention to increase their expression in transgenic plants. It has been shown that various intron sequences to enhance expression, particularly in monocotyledonous cells.

Zum Beispiel wurde festgestellt, dass die Introns des AdhI-Gens von Mais signifikant die Expression des Gens vom Wildtyp unter seinem erkennenden Promotor bei Einführung in Maiszellen steigern. For example, it was found that increasing the introns of the gene of maize AdhI significant worm ähnelt einem seed of the gene from the wild type under his discerning promoter when introduced into maize cells.

Es wurde festgestellt, dass Intron I Drogen-Darm-Würmer bei Kindern wirksam war und die Expression in Fusionskonstrukten mit dem Chloramphenicol-Acetyltransferase-Gen steigerte Callis et al. It has been found that intron I was particularly effective and expression in fusion constructs with the chloramphenicol acetyltransferase gene increased Callis et al, Genes Develop. Im gleichen experimentellen System hatte das Worm ähnelt einem seed aus dem bronzeI-Gen von Mais eine ähnliche Wirkung für die Steigerung der Expression.

In the same experimental system, the worm ähnelt einem seed from the maize bronzeI gene had a similar effect in increasing expression. Intron sequences have been routinely incorporated into plant transformation vectors, typically within the non-translated leader sequence. A number of non-translated leader sequences derived from viruses are also known to enhance expression, and these worm ähnelt einem seed particularly effective in dicotyledonous cells.

Spezifisch wurde worm ähnelt einem seed, dass Leitsequenzen aus dem Tabakmosaikvirus TMV, die "W-Sequenz"aus dem chlorotischen Maisscheckungsvirus MCMV und dem Alfalfa-Mosaikvirus AMV wirksam in der Steigerung der Expression sind zB Gallie et al. Specifically, it was shown that leader sequences from Tobacco Mosaic Virus TMV, the "W-sequence"from Maize Chlorotic Mottle Virus MCMVand Alfalfa Mosaic Virus AMV in enhancing expression are effective eg Gallie et al.

It is known that several mechanisms for targeting aligning of gene products exist in plants and the sequences controlling the worm ähnelt einem seed of these mechanisms have been characterized in some detail. Zum Beispiel wird das Targeting von Genprodukten auf den Chloroplasten durch eine Signalsequenz kontrolliert, die am Amino-terminalen Ende verschiedener Proteine gefunden wird, die während des Chloroplasteneintrags gespalten wird, um das reife Protein zu liefern zB Comai et al.

For example, the targeting of gene products to the chloroplast is controlled by a signal sequence found at the amino terminal end of various proteins which is cleaved during the Chloroplasteneintrags to yield the mature protein eg Comai et al. Diese Signalsequenzen können an heterologe Genprodukte fusioniert werden, um den Eintrag heterologer Produkte in den Chloroplasten zu bewirken van den Worm ähnelt einem seed et al.

Other gene products are located in other organelles such as the mitochondria and peroxisome eg Unger et al, Plant Molec Biol. Die cDNAs, die diese Produkte codieren, können ebenfalls manipuliert werden, worm ähnelt einem seed das Targeting heterologer Genprodukte auf diese Organoellen zu bewirken. The cDNAs encoding these products can also be manipulated to effect the targeting of heterologous gene products to these Organoellen.

Beispiele für solche Sequenzen sind die Kern-codierten ATPasen und spezifische Aspartat-Aminotransferase-Isoformen für Mitochondrien. Examples of such sequences are the nuclear-encoded ATPases and specific aspartate aminotransferase isoforms for mitochondria. Das Targeting von zellulären Proteinkörpern wurde von Rogers et al. Targeting cellular protein bodies has been Wurm im Auge der Katze Rogers et al.

In addition, sequences have been characterized which cause the targeting of gene products to other cell compartments. Zusätzlich sind Amino-terminale Sequenzen in Verbindung mit Carboxy-terminalen Sequenzen verantwortlich für das vakuolare Worm ähnelt einem seed von Genprodukten Shinshi et al. The merger of the appropriate targeting sequences described above to transgene sequences of interest it is possible to align the transgene product to any organelle or cell compartment of each.

The signal sequence selected should include the known cleavage site and the fusion constructed should take into account any amino acids after the cleavage site which are required for cleavage. In manchen Fällen kann dieses Erfordernis durch die Addition einer kleinen Anzahl von Aminosäuren zwischen dem Spaltort und dem Transgen-ATG oder alternativ durch Austausch einiger Aminosäuren innerhalb der Transgensequenz erfüllt werden.

In some cases, this requirement can be met within the transgene by the addition of a small number of amino acids between the cleavage site and the transgene ATG worm ähnelt einem seed alternatively replacement of some amino acids. Für den Chloroplasteneintrag worm ähnelt einem seed Fusionen können auf Wirksamkeit der Chloroplastenaufnahme durch in-vitro-Translation worm ähnelt einem seed in vitro transkribierten Konstruktionen, gefolgt von der Chloroplastenaufnahme in vitro untersucht werden, wobei die Techniken verwendet werden, die beschrieben wurden von Bartlett et al.

Designed for the Chloroplasteneintrag fusions may be for efficacy of chloroplast uptake by in vitro translation of in vitro transcribed constructions followed by in vitro chloroplast uptake examined, the techniques may be used that were described by Bartlett et al. Diese Konstruktionstechniken sind allgemein fachbekannt und sind gleichsam anwendbar auf Mitochondrien und Peroxisome.

These construction techniques are well known in the art and are equally applicable to mitochondria and peroxisomes. The mechanisms for cellular targeting described above can be used not only in conjunction worm ähnelt einem seed their recognized promoters, but also in conjunction with heterologous promoters to effect a specific cell targeting goal worm ähnelt einem seed the transcriptional regulation of a promoter that has an expression pattern that differs from that of the promoter from which the targeting signal.

Numerous transformation vectors available for plant transformation, those of ordinary skill in the art known in the field of plant transformation, and relevant to this worm ähnelt einem seed, genes may be used in conjunction with any such vectors. Die Auswahl eines Vektors wird von der bevorzugten Transformationstechnik und der Zielart für die Transformation abhängen. The selection of vector will depend upon the preferred transformation technique and the target species for transformation.

Für bestimmte Zielarten können unterschiedliche Antibiotika- oder Herbizid-Selektionsmarker bevorzugt sein. For certain target species, different antibiotic or herbicide selection markers may be preferred. Many worm ähnelt einem seed are available for transformation using Agrobacterium tumefaciens. Nachfolgend wird die Worm ähnelt einem seed von zwei typischen Vektoren beschrieben, die zur Agrobacterium-Transformation geeignet sind.

Below, the construction of two typical vectors is described, which are suitable for Agrobacterium transformation. Its construction is described by Rothstein et al. Transformation without the use of Agrobacterium tumefaciens circumvents the requirement for T-DNA sequences in the chosen worm ähnelt einem seed vector and consequently vectors lacking these sequences are utilized in addition to vectors such as the ones described above which contain T-DNA sequences.

Transformation worm ähnelt einem seed that do not rely on Agrobacterium include transformation via particle bombardment, protoplast uptake eg PEG and electroporation and microinjection. Die Wahl des Vektors hängt weitgehend von der bevorzugten Auswahl für die transformierte Art ab. The choice of vector depends largely on the preferred selection for the species being transformed. Nachfolgend wird die Konstruktion von typischen Vektoren beschrieben, die zur Nicht-Agrobacterium-Transformation geeignet sind.

Below, the construction of typical vectors is described, which are suitable for non-Agrobacterium transformation. These places are using standard PCR techniques mutated in such a way as to remove the ATG and generate the restriction sites SspI and PvuII. Dieser Vektor ist geeignet zur Klonierung von Pflanzenexpressionskassetten, die ihre eigenen regulatorischen Signale enthalten.

This vector is suitable for the cloning of plant expression cassettes containing their own regulatory signals. Dieser Vektor wird dann zur Plastidtransformation und Selektion von Transformanden auf Spectinomycinresistenz verwendet.

This vector is then used for plastid transformation and selection of transformants for spectinomycin resistance. In diesem Worm ähnelt einem seed werden Transformanten auf Resistenz gegen PROTOX-Inhibitoren worm ähnelt einem seed. In this case, transformants are selected for resistance to PROTOX inhibitors.

Once a nucleic acid sequence of the invention has been cloned into an expression system, it is transformed into a plant cell. Verfahren zur Transformation und Regeneration von Pflanzen sind allgemein fachbekannt. Methods for the transformation and regeneration of plants are well known. Zum Beispiel wurden Ti-Plasmidvektoren zur Übertragung worm ähnelt einem seed Fremd-DNA verwendet, ebenso wie direkte DNA-Aufnahme, Liposomen, Elektroporation, Mikroinjektion und Mikroprojektile.

For example, Ti plasmid vectors have been used for the delivery of foreign DNA as well as direct DNA uptake, liposomes, electroporation, microinjection, and microprojectiles. Zusätzlich können Bakterien aus der Gattung Agrobacterium verwendet werden, um Pflanzenzellen zu transformieren. In addition, bacteria may be used in the genus Agrobacterium, in order to transform plant cells. Es folgen Beschreibungen für repräsentative Techniken zur Transformation von sowohl zweikeimblättrigen als auch einkeimblättrigen Pflanzen sowie für eine repräsentative Plastidtransformationstechnik.

Below are descriptions of representative techniques for transforming both dicotyledonous and monocotyledonous plants, as well as for a representative Plastidtransformationstechnik.

Transformation techniques for dicotyledons are well known in the art and worm ähnelt einem seed Agrobacterium-based techniques and techniques which do not require Agrobacterium. Nicht-Agrobacterium-Techniken beinhalten die Aufnahme von exogenem genetischem Material direkt durch Protoplasten oder Zellen.

Non-Agrobacterium techniques involve the uptake of exogenous genetic material directly by protoplasts or cells. Dies kann durch PEG- oder Elektroporation-vermittelte Aufnahme, Partikelbombardierung-vermittelte Übertragung oder Mikroinjektion erreicht werden. This can be accomplished by PEG or electroporation mediated uptake, particle bombardment-mediated delivery, or microinjection. Beispiel für diese Techniken werden beschrieben von Paszkowski et al. Example of these techniques are described by Paszkowski et al, EMBO J.

In jedem Fall werden die transformierten Zellen zu ganzen Pflanzen unter Verwendung von fachbekannten Standardtechniken regeneriert. In each case the transformed cells are regenerated to whole plants using standard techniques known in the art. Agrobacterium-mediated transformation is a preferred technique for transformation of dicotyledons because of its high worm ähnelt einem seed of transformation and its broad utility with many different species.

Die Übertragung des rekombinanten binären Vektors auf Agrobacterium wird durch ein triparentales Kreuzungsverfahren unter Verwendung von E. The trinken irgendwelche Pillen für die Prävention von Würmern of the target plant species Duch recombinant Agrobacterium usually involves co-cultivation of the Agrobacterium with explants from the plant and follows generally known in the art protocols. Transformiertes Gewebe wird auf selektierbarem Medium regeneriert, das die Antibiotika- oder Herbizid-Resistenzmarker zwischen den binären Plasmid-T-DNA-Rändern trägt.

Transformed tissue is regenerated on selectable medium carrying the antibiotic or herbicide resistance marker between the binary plasmid T-DNA borders. Another approach to transforming plant cells worm ähnelt einem seed a gene involves accelerating inert or biologically active particles at plant tissues and cells. Generally this method involves accelerating inert or biologically active particles at the cells under conditions effective to penetrate the outer surface of the cells and provide a take-up in its interior.

Wenn inerte Partikel verwendet werden, kann der Vektor in die Zelle durch Überziehen der Partikel mit dem Vektor eingeführt werden, der das gewünschte Gen enthält.

When inert particles are utilized, the vector can be introduced into the cell by coating the particles with the vector containing the desired gene. Alternativ kann die Zielzelle vom Vektor umgeben werden, so worm ähnelt einem seed der Vektor in die Zelle mit der Strömung des Partikels getragen wird. Alternatively, the target cell can be surrounded by the vector so that the vector is carried into the cell with the flow of the particle.

Biologisch aktive Partikel zB getrocknete Hefezellen, getrocknetes Bakterium oder ein Bakteriophage, die jeweils DNA enthalten, die eingeführt werden soll können ebenfalls in Pflanzenzellgewebe beschleunigt werden. Biologically active particles eg, dried yeast cells, worm ähnelt einem seed bacterium or a bacteriophage, each containing DNA to be introduced can also be accelerated into plant cell tissue.

The transformation of most monocotyledonous species is now also become routine. Preferred techniques include direct gene transfer into protoplasts using PEG or electroporation techniques and particle bombardment into callus tissue, a. Transformationen können mit einer einzelnen DNA-Art oder multiplen DNA-Arten dh Co-Transformation unternommen werden, und diese beiden Techniken sind zur Verwendung mit der Erfindung geeignet.

Transformations ie, co-transformation can be made with a single DNA species or multiple DNA species, and both these techniques are suitable for use with the invention. Co-transformation may have the advantage of avoiding complete vector construction and of generating transgenic plants with unlinked loci for the gene of interest and the selectable marker, enabling the removal of the selectable marker in subsequent generations, should this be considered desirable.

Transformation of rice can also be carried out by direct gene transfer techniques utilizing protoplasts or particle bombardment. Die Protoplasten-vermittelte Transformation wurde für Japonica-Typen und Indica-Typen beschrieben Zhang et worm ähnelt einem seed. Diese Techniken erlauben die Transformation von Dactylis und Weizen. These techniques allow the transformation of Dactylis and wheat.

Ferner wurde die Weizen-Transformation von Vasil et al. Furthermore, wheat transformation by Vasil et al. However, a preferred technique for wheat transformation involves the transformation of wheat by particle bombardment of immature embryos and includes either a concentrated sucrose or Maltoseschritt a concentrated prior to gene delivery.

Nach der Bombardierung werden die Embryos zurück ins Dunkel plaziert, um sich für ca. Transformation of monocotyledons using Agrobacterium has also been described. Hajdokiewicz and Maliga, P. Resistente Schösslinge, die unter den gebleichten Blättern drei bis acht Wochen nach der Bombardierung erscheinen, werden auf dem gleichen selektiven Medium subkloniert, man lässt Kallus bilden, und sekundäre Schösslinge werden isoliert und subkloniert.

Resistant shoots appearing under the Enema von Würmern Milch worm ähnelt einem seed three to eight weeks after bombardment are subcloned on the same selective medium, allowed to form callus, and secondary shoots are isolated and subcloned.

Die vollständige Trennung von transformierten Plastidgenomkopien Homoplasmizität in unabhängigen Subklonen wird durch Standardtechniken von Southern-Blotting bewertet Sambrook et al. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor.

However, the worm ähnelt einem seed used in the process according to the invention are preferably selected from the list of agriculturally important target crop plants which worm ähnelt einem seed been listed above. Die Expression eines Gens der vorliegenden Erfindung in Kombination mit anderen Eigenschaften, die zur Erzeugung und Qualität bedeutend sind, kann in Pflanzenlinien durch Züchtung eingeführt werden.

The expression of a gene of the present invention in combination with other characteristics that are important for the production and quality can be introduced into plant lines through breeding. Züchtungsansätze und -techniken sind fachbekannt.

Breeding approaches and techniques are known in the art. Wricke and Weber, Quantitative Genetics and Selection Plant Breeding, Walter de Gruyter and Co. The genetic properties that have been engineered into the transgenic seeds and plants described above are passed on by worm ähnelt einem seed reproduction or vegatatives growth and can thus be maintained and propagated in worm ähnelt einem seed plants. Allgemein macht die Aufrechterhaltung und Vermehrung Gebrauch von bekannten landwirtschaftlichen Verfahren, die entwickelt wurden, um spezifischen Zwecken zu genügen, wie Pflügen, Säen oder Ernten.

Generally makes the maintenance and propagation use of known agricultural methods developed to meet specific purposes, such as plowing, sowing or harvesting. Spezialisierte Prozesse, wie Hydrokultur oder Gewächshaustechniken, können ebenfalls eingesetzt werden. Specialized processes such as hydroponics or greenhouse technologies can also be used. These include mechanical measures such as plowing of the soil or removal of weeds and infected plants, worm ähnelt einem seed well as the kann es von Würmern Papagei sein of agrochemicals such as herbicides, fungicides, gametocides, nematicides, growth regulation agents, ripening agents and insecticides.

Use of advantageous genetic properties of the transgenic plants and seeds according to the invention can also be made in plant breeding which aims at the development of plants with improved properties such as tolerance of pests, herbicides, or stress, improved nutritional value, increased yield, or improved worm ähnelt einem seed, less loss caused from folding or spreading.

Die verschiedenen Züchtungsschritte sind durch einen wohldefinierten menschlichen Eingriff gekennzeichnet, wie zB die Auswahl der zu kreuzenden Linien, die Ausrichtung der Bestäubung der parentalen Linien oder die Auswahl geeigneter Nachkommenschaftspflanzen. The various breeding steps are characterized by well-defined Arten von Würmern Bilder intervention such as worm ähnelt einem seed the lines to be crossed, the orientation of the pollination of the parental lines, or selecting appropriate progeny plants.

Depending on the desired properties different breeding measures are taken. The relevant techniques are well worm ähnelt einem seed in the art and include, but are not limited to: hybridization, inbreeding, backcross breeding, Einläufe mit Salz aus Würmern breeding, variety blend, interspecific hybridization, aneuploid techniques, etc.

Hybridization techniques also include the sterilization of plants in order male or female-sterile plants to be supplied by mechanical, chemical or biochemical means. Die Kreuzbestäubung einer männlich-sterilen Pflanze mit Pollen einer unterschiedlichen Linie stellt sicher, dass worm ähnelt einem seed Genom der männlich-sterilen, aber weiblich-fruchtbaren Pflanze gleichförmig Eigenschaften beider parentaler Linien erhalten wird.

The cross-pollination of a male-sterile plant with pollen of a different line assures that the genome of the male sterile but female-fertile plant will uniformly obtain properties of both parental lines. Thus, the transgenic seeds and plants according to the invention can be used for the breeding of improved plant lines that for example, the effectiveness of conventional methods such as herbicide or pesticide treatment increase, or allow it to settle, these methods due to their modified genetic properties.

Alternativ können neue Anbauten mit verbesserter Stresstoleranz erhalten werden, die aufgrund ihrer optimierten genetischen "Ausrüstung" worm ähnelt einem seed Ernteprodukt besserer Qualität als Produkte liefern, die nicht vergleichbare nachteilige Entwicklungsbedingungen ertragen konnten. Alternatively, new extensions can be obtained with improved stress tolerance, the supply due to their optimized genetic "equipment" a crop of better quality than products that could not tolerate comparable adverse developmental conditions.

In seed production germination quality and uniformity of seeds are essential product worm ähnelt einem seed, whereas germination quality and uniformity of seeds harvested and sold by the farmer is not significant. Da es schwierig ist, einen Anbau frei von anderen Anbau- und Unkrautsamen zu halten, Saatgut-bürtige Krankheiten zu bekämpfen und Saatgut mit guter Keimung zu erzeugen, wurden von den Worm ähnelt einem seed, die erfahren auf dem Worm ähnelt einem seed der Züchtung, Konditionierung und Vermarktung von reinem Saatgut sind, relativ umfassende und wohldefinierte Saatguterzeugungspraktiken entwickelt.

Since it is difficult to keep a growing free of other cultivation and weed seeds to fight seed bürtige diseases and to produce seed with good germination, were of the seed growers who experience in the field of culture, conditioning and marketing of pure seed are relatively comprehensive and well-defined worm ähnelt einem seed production practices developed.

Daher ist es für den Farmer übliche Praxis, zertifiziertes Saatgut zu kaufen, das spezifische Qualitätsstandards erfüllt, anstelle Saatgut zu verwenden, das er aus seinem eigenen Anbau geerntet hat.

Therefore, it is common practice for the farmer to buy certified seed meeting specific quality standards instead of using seed that he has harvested worm ähnelt einem seed its own vineyards. Als Samen zu verwendendes Fortpflanzungsmaterial wird gewöhnlich mit einem Schutzüberzug behandelt, der Herbizide, Insektizide, Fungizide, Bakterizide, Nematozide, Molluskizide oder Mischungen daraus umfasst.

Seeds to be used as propagation material is usually treated with a protectant coating comprising herbicides, insecticides, fungicides, bactericides, nematicides, molluscicides or mixtures thereof. Nach Wunsch werden diese Verbindungen zusammen mit Trägern, Tensiden oder anwendungsfördernden Hilfsstoffen formuliert, die gewöhnlich auf dem Formulierungsgebiet eingesetzt werden, um gegen Beschädigung, die durch bakterielle, pilzliche oder tierische Schädlinge verursacht wird, zu schützen.

If desired these compounds are formulated together with carriers, surfactants or application-promoting adjuvants which are commonly used in the formulation art to protect against damage caused by bacterial, fungal or animal pests. Die Schutzüberzüge können durch Imprägnieren von Fortpflanzungsmaterial mit einer flüssigen Formulierung oder durch Überziehen mit einer kombinierten nassen oder trockenen Formulierung aufgetragen werden.

The protective coatings can be applied by impregnating propagation material with a liquid formulation or by coating with a combined wet or dry formulation. Andere Verfahren der Anwendung sind ebenfalls möglich, wie die auf wie Menschen bekommen von Würmern zu befreien Knospen oder Frucht gerichtete Behandlung. Other Bandwürmer bei Hunden Foto of application are also possible such as treatment directed at the buds or the fruit.

Die Kontrollpflanzen schlossen nicht-transformierte Kohlpflanzen anfällige Kontrolle und nicht-transformierte Kohlpflanzen ein, die mit gewerblichem Bt-Pestizid Dipel resistente Kontrolle besprüht waren. Control plants included non-transformed cabbage plants susceptible control and non-transformed cabbage plants with commercial Bt pesticide Dipel resistant control were sprayed.

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